Moderné metódy diagnostiky HIV infekcie

Včasná diagnostika infekcie HIV sa stáva mimoriadne dôležitým opatrením, pretože skorší začiatok liečby môže do značnej miery ovplyvniť ďalší vývoj ochorenia a predĺžiť život pacienta AIDS. V posledných rokoch bol zaznamenaný značný pokrok pri identifikácii tohto strašného ochorenia: staré testovacie systémy sú nahradené pokročilejšími, prístupné sú skúšobné metódy a ich presnosť sa výrazne zvyšuje.

V tomto článku budeme hovoriť o moderných metódach diagnostiky HIV infekcie, s vedomím, že je užitočná pre včasnú liečbu tohto problému a udržiavanie normálnej kvality života chorých.


Metódy diagnostiky HIV

V Rusku sa vykonáva štandardný postup na diagnostikovanie infekcie HIV, ktorý zahŕňa dve úrovne:

  • testovací systém ELISA (skríningová analýza);
  • imunitné blotovanie (IB).

Na diagnostiku možno použiť aj iné metódy:

  • PCR;
  • rýchle skúšky.

Testovacie systémy ELISA

V prvej fáze diagnózy sa na detekciu infekcie HIV používa skríningový test (ELISA), ktorý je založený nalaboratórne vytvorené HIV proteíny, ktoré zachytávajú špecifické protilátky produkované v tele ako odpoveď na infekciu.Po ich interakcii s činidlami (enzýmami) testovacieho systému sa zmení farba indikátora.Tieto zmeny farieb sa ďalej spracovávajú na špeciálnom zariadení, ktoré určuje výsledok vykonanej analýzy.

Takéto testy ELISA dokážu preukázať výsledok v priebehu niekoľkých týždňov po zavedení infekcie HIV.Táto analýza neurčuje prítomnosť vírusu, ale odhaľuje produkciu protilátok.Niekedy, v ľudskom tele, produkcia protilátok proti HIV začína po 2 týždňoch v oblasti infekcie, ale pre väčšinu ľudí sú vyrábané neskôr, po 3-6 týždňoch.

Existujú štyri generácie testov ELISA s rôznou citlivosťou.V posledných rokoch sa častejšie používajú testovacie systémy tretej a štvrtej generácie, ktoré sú vytvorené na báze syntetických peptidov alebo rekombinantných proteínov a majú vyššiu špecifickosť a presnosť.Môžu byť použité na diagnostikovanie infekcie HIV, sledovanie prevalencie HIV a zabezpečenie bezpečnosti pri testovaní krvi darcu.Presnosť testovacích systémov ELISA III a IV je 93-99% (testy, ktoré sa vyrábajú v západnej Európe sú citlivejšie - 99%).

Na vykonanie testu ELISA sa z žily pacienta odoberie 5 ml krvi.Medzi posledným jedlom a analýzou by malo trvať najmenej 8 hodín (spravidla sa vykonáva ráno nalačno).Takýto test sa odporúča absolvovať najskôr 3 týždne po ňompodozrenie z infekcie (napríklad po nechránenom styku s novým sexuálnym partnerom).

Výsledky testu ELISA sa získajú za 2-10 dní:

  • negatívny výsledok: indikuje neprítomnosť infekcie HIV a nevyžaduje kontaktovanie špecialistu;
  • falošne negatívny výsledok: môže byť pozorovaný v skorých štádiách infekcie (do 3 týždňov), v neskorých štádiách AIDS, s výrazným potlačením imunitného systému av prípade nesprávnej prípravy krvi;
  • falošne pozitívny výsledok: možno pozorovať pri niektorých chorobách av prípade nesprávne vykonanej prípravy krvi;
  • pozitívny výsledok: indikuje infekciu HIV, vyžaduje vykonanie informačnej bezpečnosti a odkázanie pacienta na špecialistu v centre AIDS.

Prečo môže test ELISA priniesť falošne pozitívne výsledky?

Falošne pozitívne výsledky testu ELISA na HIV možno pozorovať pri nesprávnej liečbe krvi alebo u pacientov s takýmito stavmi a chorobami:

  • mnohopočetný myelóm;
  • alkoholická hepatitída ;
  • infekčné ochorenia vyvolané vírusom Epstein-Barr;
  • stav po dialýze ;
  • autoimunitné ochorenia;
  • na pozadí tehotenstva;
  • stav po vakcinácii.

Z vyššie uvedených dôvodov môžu byť v krvi prítomné nešpecifické skrížene reagujúce protilátky, ktorých produkcia bola vyvolaná infekciou ne HIV.

V posledných rokoch sa počet falošne pozitívnych výsledkovvýznamne znížená v dôsledku použitia testovacích systémov generácie III a IV, ktoré obsahujú citlivejšie peptidové a rekombinantné proteíny (sú syntetizované použitím genetického inžinierstva in vitro). Po začiatku použitia takýchto testov ELISA sa frekvencia falošne pozitívnych výsledkov významne znížila a je okolo 0,02-0,5%.

Zisťovanie falošne pozitívneho výsledku neznamená, že osoba je infikovaná HIV. V takýchto prípadoch WHO odporúča ďalší test ELISA (povinná IV generácia).

Krv pacienta sa posiela do referenčného alebo rozhodcovského laboratória s „opakovanou“ značkou a testuje sa na testovacom systéme ELISA štvrtej generácie. Ak je výsledok novej analýzy negatívny, potom sa prvý výsledok považuje za chybný (falošne pozitívny) a nevykonáva sa žiadna IB. Ak je pozitívny alebo pochybný výsledok počas druhého testu, pacient musí dostať IB po 4-6 týždňoch na potvrdenie alebo odmietnutie infekcie HIV.

Imunitné Blot

Konečnú diagnózu infekcie HIV možno stanoviť až po pozitívnom výsledku imunitného prenosu (IB). Na ňu sa nanesie nitrocelulózový pásik, na ktorý sa aplikujú vírusové proteíny.

Odber vzoriek krvi pre IB sa vykonáva zo žily. Potom sa podrobí špeciálnemu spracovaniu a proteíny obsiahnuté v sére sa separujú v špeciálnom géle podľa ich náboja a molekulovej hmotnosti (manipulácia sa vykonáva na špeciálnom zariadení pod vplyvom elektrického zariadenia).poľa). Na gél z krvného séra naneste nitrocelulózový pás a vykonajte blotovanie ("blotting") v špeciálnej komore. Pás sa spracuje a ak použité materiály majú protilátky proti HIV, sú spojené s antigénnymi pásmi na IB a objavujú sa ako čiary.

IS sa považuje za pozitívny, ak:

  • podľa amerických CDC kritérií - na páse sú dva alebo tri gp41, p24, gpl20 /gpl60 riadky;
  • podľa kritérií amerického FDA - na páse sú dve čiary p24, p31 a línia gp41 alebo gpl20 /gpl60.

V 99,9% prípadov pozitívny výsledok IB indikuje infekciu HIV.

Pri neprítomnosti riadkov je IB negatívna.

Pri identifikácii riadkov pomocou gp160 sú pochybnosti gp120 a gp41-IB. Tento výsledok možno zistiť, keď:

  • počiatočné štádiá infekcie HIV ;
  • tuberkulóza ;
  • onkologické ochorenia;
  • tehotenstvo;
  • časté krvné transfúzie.

V takýchto prípadoch sa odporúča vykonať opätovné preskúmanie pomocou súboru inej spoločnosti. Ak po dodatočnej IB výsledok zostáva pochybný, potom je potrebné pozorovanie do šiestich mesiacov (IB sa vykonávajú každé 3 mesiace).

Polymerázová reťazová reakcia

PCR test môže určiť vírusovú RNA. Jeho citlivosť je dostatočne vysoká a umožňuje detekciu infekcie HIV do 10 dní po infekcii. V niektorých prípadoch môže PCR poskytnúť falošne pozitívne výsledky, pretože jej vysoká citlivosť môže tiež reagovať na protilátky proti iným infekciám.

Táto diagnostická technika je nákladná, vyžaduje špeciálne vybavenie a vysoko kvalifikovaných odborníkov. Tieto dôvody neumožňujú, aby sa vykonávali pri masovom testovaní obyvateľstva.

V takýchto prípadoch sa používa PCR:

  • odhaliť HIV u novorodencov, ktorí sa narodili matkám infikovaným HIV;
  • odhaliť HIV v „okienkovom období“ alebo pri spornej informačnej bezpečnosti;
  • na kontrolu koncentrácie HIV v krvi;
  • na štúdium darcovskej krvi.

Iba testom PCR sa HIV diagnostikuje, ale vykonáva sa ako dodatočná diagnostická metóda na riešenie sporných situácií.


Expresné metódy

Jednou z inovácií v diagnostike HIV sa stali rýchle testy, ktorých výsledky sa môžu vyhodnotiť v priebehu 10 - 15 minút. Najúčinnejšie a najpresnejšie výsledky sa získajú pomocou imunochromatografických testov založených na princípe kapilárneho toku. Sú to špeciálne prúžky, na ktoré sa aplikuje krv alebo sa skúmajú iné tekutiny (sliny, moč). V prítomnosti protilátok proti HIV sa po 10-15 minútach na teste objaví kontrolný prúžok - pozitívny výsledok. Ak je výsledok negatívny, zobrazí sa len riadiaca lišta.

Ako po testoch ELISA, výsledky rýchlych testov by sa mali potvrdiť analýzou IB. Až potom môže byť diagnostikovaná infekcia HIV.

Existujú expresné súpravy na domáce testovanie. OraSure Technologies1 (USA) test schválený FDA, predanýbez lekárskeho predpisu a môže byť použitý na detekciu HIV. Po teste sa v prípade pozitívneho výsledku odporúča vyšetrenie pacienta v špecializovanom centre, aby sa potvrdila diagnóza.

Zostávajúce testy na domáce použitie ešte neboli schválené úradom FDA a ich výsledky môžu byť veľmi pochybné.

Napriek tomu, že rýchle testy sú horšie v ich presnosti na testy štvrtej generácie testov ELISA, široko sa používajú na ďalšie testovanie populácie.

Je možné absolvovať testy na zistenie infekcie HIV na akejkoľvek klinike, centrálnej a regionálnej nemocnici alebo v špecializovaných centrách AIDS. Na území Ruska sa vykonávajú absolútne dôverne alebo anonymne. Každý pacient môže očakávať, že dostane lekárske alebo psychologické poradenstvo pred analýzou alebo po nej. Budete musieť platiť za HIV testy len v komerčných nemocniciach, zatiaľ čo na verejných klinikách a nemocniciach sa vykonávajú bezplatne.

Informácie o tom, akým spôsobom sa môžete nakaziť HIV a aké mýty existujú o možnostiach nakazenia sa, si prečítajte tento článok.

Ktorý lekár konzultovať

Aby bolo možné testovať na HIV, musíte navštíviť terapeuta a odporučiť mu, aby ste ho analyzovali. Okrem toho môžete prísť priamo do Centra pre prevenciu a kontrolu AIDS a testovať tam anonymne. Ak je podozrenie na infekciu HIV, je to odporučené špecialistom na infekčné choroby alebo venereológom.